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Nanophotometer?是利用樣品壓縮法進行濃度測量的多功能儀器,廣泛應用于生命科學和生物醫藥領域。由于壓縮法具有良好的樣品兼容性,特別適合于各類蛋白質樣品的定量,無論是純化蛋白、總蛋白、肽段樣品或混合樣品,均有對應的方法學支持。您可根據應用要求,選擇合適的機型進行蛋白質的定量分析,獲得可靠的結果。
UV280法 – 純化蛋白定量金標準
對于具有確定消光系數的純化蛋白,基于芳香族典型氨基酸的紫外吸收,UV280法可以非常準確的進行濃度測量,也是Nanophotometer?最常用的應用之一。使用UV280法時,應避免較強吸收物種的干擾,如裂解液RIPA成分。而對于消光系數未知的樣品,也可使用OD1法進行相對濃度測量或估算。設備內置了常用蛋白質的消光系數,可以直接調用,也可以自定義消光系數,您可訪問Implen官網:
https://www.implen.de/protein-uv-spectrophotometer/
輸入蛋白質的氨基酸序列,進行消光系數的計算。
四種標準曲線方法
Nanophotometer?可進行四種蛋白質標準曲線法的分析(各型號有差異),分別為BCA、Bradford、Lowry和Biuret (僅支持比色皿測量),可通過對應的試劑盒與蛋白樣品進行反應,通過標準曲線計算蛋白濃度,適用于總蛋白及純化蛋白的定量。Nanophotometer?不同機型的掃描波長在200-650nm或200-900nm,涵蓋了可見光區吸收的應用。標準曲線支持存儲及直接調用,即使是單通道的機型也能便捷的進行標曲法蛋白定量。而N120高通量機型則支持標準曲線的多通道測量,可大幅提升測量效率。
A205肽鍵吸收法 – 寡肽定量
對于缺少芳香族典型氨基酸的寡肽和肽段樣品,由于無吸收峰,UV280法可能不適用。此時可使用UV205法測量肽鍵的半峰吸收,獲得樣品的吸光值和濃度。近紫外區的測量對于超微量分光光度計而言具有挑戰性,容易受到檢測器和光學系統噪聲及漂移的影響。Nanophotometer?具有出色的光學系統和4096CMOS陣列檢測器配置,可確保在全波長范圍內的測量準確性。
公式法 – 混合物中蛋白定量
一些樣本中除蛋白質外還包含其他在280nm處有吸收的組分,可通過校正系數及公式進行其中蛋白濃度的測量,如含有核酸的樣本,可使用經驗公式:蛋白質濃度=1.45×A280-0.74×A260。也可通過純品的測量,確認A280的校正系數,進行干擾組分吸光值的扣除。Nanophotometer?可進行公式創建,滿足混合物中蛋白定量的應用需求。
獨特的樣品壓縮技術使Nanophotometer?區別于同類產品,蛋白質樣品由于溶質和溶劑成分、粘度等因素的影響,往往會降低表面張力而不易被測量,而這恰恰令樣品壓縮法能夠大顯身手。設備具備豐富的蛋白質測量應用程序及方法學設定,還具備背景校正和樣品質量控制功能。僅需微升級樣品,即可獲得紫外-可見全光譜吸收數據,包括蛋白及偶聯物的同時分析。從生物醫學到藥物研發,從結構生物學到交叉學科,Nanophotometer?是蛋白質定量的理想工具。